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從土壤中輕松獲取高質(zhì)量RNA
更新時(shí)間:2010-11-16 | 點(diǎn)擊率:2407
詳細(xì)介紹:
從土壤中輕松獲取高質(zhì)量
RNA
*,從土壤中提取DNA已非易事,而想從中再提取RNA可說是難上加難。DNA不容易提取是因?yàn)楸旧硗寥乐懈患牟牧暇蜕伲崛∵^程相對(duì)復(fù)雜,造成操作損失;而RNA不容易提取除了以上所提到的原因外,還有一個(gè)很關(guān)鍵的原因——無處不在的RNA酶,對(duì)RNA的穩(wěn)定存在構(gòu)成極大威脅。另外還有一點(diǎn)就是土壤中某些物質(zhì)的微量殘留都會(huì)影響到科研人員后期PCR反應(yīng)。這就是目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)中土壤RNA提取產(chǎn)品不多的原因。
因此要想對(duì)土壤RNA有較好的提取效果,我們就必須知己知彼,既要對(duì)研究對(duì)象(土壤)熟知,又要對(duì)研究工具(試劑盒)熟悉。
土壤中重要物質(zhì)腐殖質(zhì)
土壤除了為陸生植物提供營(yíng)養(yǎng)源和水分之外,還是植物生長(zhǎng),進(jìn)行光合作用、能量交換的主要場(chǎng)所;同時(shí)也具有微生物生長(zhǎng)繁殖所需要的一切營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及各種條件,是微生物良好的生活場(chǎng)所,有“微生物的天然培養(yǎng)基”之稱。因此土壤是一種重要的環(huán)境要素。
簡(jiǎn)單說,土壤是由固相(礦物質(zhì)、有機(jī)質(zhì))、液相(土壤水分或溶液)和氣相(土壤空氣)三相物質(zhì)四種成分有機(jī)地組成。而所有這些組成在土壤微生物的存在下卻能形成一種對(duì)作物生長(zhǎng)有利,對(duì)科研人員非常不利的物質(zhì)——腐殖質(zhì)。污泥中也不例外,同樣有腐植酸和富里酸存在。
腐殖質(zhì)是由一些異養(yǎng)的微生物,如某些腐生細(xì)菌,把土壤中的動(dòng)、植物殘?bào)w和有機(jī)肥料分解,與礦物質(zhì)顆粒緊密結(jié)合在一起而形成的一種黑色的膠狀物質(zhì),是土壤有機(jī)質(zhì)的主要類型,一般占土壤有機(jī)質(zhì)總量的85—90%以上。腐殖質(zhì)既含有氮、磷、 鉀、疏、鈣等大量元素,還有微量元素;另外在分解過程中還會(huì)產(chǎn)生腐殖酸、有機(jī)酸、維生素及一些激素等。在水體中,腐殖質(zhì)主要指腐殖酸和富里酸。實(shí)驗(yàn)證明,微量腐殖酸或富里酸的存在就會(huì)導(dǎo)致PCR的失敗!這在眾多公司的提取試劑盒中都有相應(yīng)說明。
再加上近期土壤污染(肥料、農(nóng)藥等)的存在,因此導(dǎo)致提取對(duì)象成份非常復(fù)雜,提取難度也就可想而知。有的公司產(chǎn)品即使有少量的RNA提出,也會(huì)造成科研人員后期的實(shí)驗(yàn)不順暢,這樣的例子已司空見慣。因此解決從土壤提取RNA后腐殖質(zhì)殘留以及其它影響成分的有效去除成了各家公司關(guān)注的焦點(diǎn)。
土壤RNA提取試劑盒
目前市場(chǎng)上常見的試劑盒大概有3-4中,這些試劑盒又通常采用玻璃珠(鋼珠)破碎的方法,然后用玻璃奶和吸附柱反復(fù)漂洗去除雜質(zhì)和腐殖酸,操作過程極其復(fù)雜,一般需要2.5小時(shí)以上的操作時(shí)間。使用,可能會(huì)因?yàn)椴襟E不熟練,超過4個(gè)小時(shí)。并且有些操作在常溫進(jìn)行,這就很難對(duì)RNA進(jìn)行有效保護(hù),結(jié)果可能會(huì)導(dǎo)致即使有RNA的提出,也不再是完整的RNA片段,造成部分或全部降解。
因此,提取過程耗時(shí)短,影響物質(zhì)(腐殖質(zhì)等)去除干凈,提取過程RNA穩(wěn)定才是從土壤中輕松獲取高質(zhì)量RNA的必要條件。針對(duì)這一目標(biāo),百泰克公司經(jīng)過多年的不斷探索,集眾家所長(zhǎng),終于開發(fā)了一款非常方便簡(jiǎn)單快捷的提取土壤(污泥)中RNA的試劑盒,該試劑盒具有以下特點(diǎn):
l 操作簡(jiǎn)便
整個(gè)過程,操作時(shí)間僅需1小時(shí),熟練時(shí),能更快,避免操作時(shí)間過長(zhǎng)RNA降解
l 破碎方法優(yōu)良
采用常見的液氮研磨,既能使RNA處于低溫的保護(hù)狀態(tài),不容易降解,又不需要特殊的設(shè)備,降低實(shí)驗(yàn)成本。同時(shí)還可避免玻璃珠破碎過于劇烈導(dǎo)致的片段機(jī)械損傷。另外,玻璃珠破碎一般需要儀器,有些試劑盒不買儀器沒法使用,而一般的渦旋也很難取得好的破碎效果。
l 新型腐殖酸去除技術(shù)
采用創(chuàng)新的腐殖酸去除技術(shù),短時(shí)間內(nèi)就可達(dá)到很好的去除效果
l 不需單獨(dú)去除DNA
操作過程中已經(jīng)去除DNA,不需另外單加DNA酶再去除DNA的步驟,省時(shí)省力。
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